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基于熒光定量PCR技術的松材線蟲快速檢測儀

發布時期:2025-12-03 10:16:49 作者: 農業氣象站  來源:超聲波氣象站   人氣:288

松材線蟲快速檢測儀是(shi)應(ying)用分子生物學技術的專業設備,通過集(ji)成松材線(xian)蟲分離、DNA提(ti)取(qu)與熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR檢(jian)測(ce)(ce)流程,實現對該有害生物的快速自(zi)動檢(jian)測(ce)(ce)。儀器自(zi)動分析并顯示結果、打(da)印報告,無需人工判(pan)讀(du),用于林業檢(jian)疫與疫木排查。


松材線蟲快速檢測儀是(shi)一種基于分子檢測技術的實(shi)驗室(shi)儀(yi)器,專門(men)用于對(dui)松(song)材線(xian)蟲(chong)進行定(ding)性與定(ding)量(liang)分析。松(song)材線(xian)蟲(chong)是(shi)引(yin)發松(song)樹萎蔫病、導致松(song)林大面積枯死的毀(hui)滅性病原生物。傳統形態學鑒定(ding)方法耗時費力且對(dui)專業(ye)人員(yuan)依賴度高,該設備的出現旨在實(shi)現快速、準確、標準化的檢測,服務于林業(ye)檢疫、疫情(qing)監測與疫木清理等環節。


該檢(jian)測(ce)儀的核心技(ji)術原理是(shi)熒光(guang)定量PCR。這(zhe)是(shi)一種在PCR擴增過(guo)程中(zhong),通(tong)過(guo)熒光(guang)信號實(shi)時監測(ce)靶標DNA數量,從而對起始模板進行定量的分子生物學技(ji)術。針對松材線(xian)蟲的特異性DNA序列設計引物與熒光(guang)探針,使得儀器能夠高(gao)特異性地識(shi)別出(chu)樣本(ben)中(zhong)是(shi)否含有松材線(xian)蟲的遺(yi)傳物質,并(bing)能估算其(qi)相對含量。


一(yi)套完整的(de)(de)(de)檢測(ce)流程主要包含三個自動化(hua)或(huo)高(gao)度集成的(de)(de)(de)步驟。第(di)一(yi)步是(shi)松材(cai)線(xian)蟲(chong)的(de)(de)(de)分離與(yu)(yu)樣本(ben)制備。操作人員將疑似感(gan)病的(de)(de)(de)松木木屑(xie)或(huo)鉆取的(de)(de)(de)木芯樣本(ben)放入設備配套的(de)(de)(de)均質或(huo)離心(xin)裝置中(zhong)。部分集成化(hua)高(gao)的(de)(de)(de)系統能自動完成樣本(ben)的(de)(de)(de)破碎與(yu)(yu)線(xian)蟲(chong)的(de)(de)(de)初(chu)步富集,為下一(yi)步提(ti)取提(ti)供預(yu)處理(li)樣本(ben)。


第二步(bu)(bu)是DNA的提取(qu)與(yu)純(chun)(chun)化(hua)。預(yu)處理(li)(li)后(hou)的樣本被轉移(yi)至核酸提取(qu)模塊。該模塊通常采用(yong)磁(ci)珠法或離心柱法等自(zi)動化(hua)方(fang)法,通過(guo)裂解、結合、洗滌、洗脫一(yi)系列程序(xu),自(zi)動從復雜(za)樣本中提取(qu)出(chu)高純(chun)(chun)度(du)的總DNA,其中包括可能存在的松材線(xian)蟲(chong)DNA。這一(yi)步(bu)(bu)去除(chu)了抑制后(hou)續PCR反應的雜(za)質,是關(guan)鍵的前處理(li)(li)環節。


第三步是(shi)熒光(guang)(guang)定量PCR檢(jian)測(ce)(ce)與結(jie)果分析。純化后的(de)DNA溶液被自動(dong)或手動(dong)加入含有特異性引物、探針及反應體系的(de)檢(jian)測(ce)(ce)卡盒或微孔(kong)板(ban)中,并(bing)置入儀器(qi)的(de)溫(wen)控檢(jian)測(ce)(ce)艙。設(she)備按照預設(she)程序進(jin)行升溫(wen)、降溫(wen)循環,驅動(dong)DNA的(de)擴(kuo)增(zeng),并(bing)實時監測(ce)(ce)每個(ge)循環后的(de)熒光(guang)(guang)強(qiang)度(du)。全部過(guo)程結(jie)束后,儀器(qi)內部的(de)軟件會根(gen)據(ju)熒光(guang)(guang)曲(qu)線(xian)和設(she)定的(de)閾值,自動(dong)判定樣本(ben)的(de)陰陽性,并(bing)可根(gen)據(ju)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)計算初始模板(ban)的(de)拷貝數(shu)。結(jie)果直接在(zai)觸(chu)摸屏上顯示,并(bing)可連接打印機輸出標(biao)準(zhun)格(ge)式(shi)的(de)檢(jian)測(ce)(ce)報(bao)告。


該設(she)(she)備的主(zhu)要(yao)特點是高效(xiao)、便捷(jie)與結果客(ke)觀。它將原本需要(yao)在(zai)多(duo)個(ge)實驗室儀(yi)器間(jian)轉移、由不同專業人(ren)員操作的多(duo)步(bu)流程整合或串聯起來,大幅(fu)縮短了檢測時間(jian),可在(zai)數小時內完成從樣本到(dao)報告的全(quan)過程。“快(kuai)速”體現在(zai)流程的集成化與自動化上。其“無需人(ren)工判讀”的特點尤為重(zhong)(zhong)要(yao),儀(yi)器依據算法(fa)和設(she)(she)定閾(yu)值進行客(ke)觀判斷(duan),消除了不同人(ren)員因經驗差異(yi)導致的判讀誤差,保證了檢測結果的標準化與可重(zhong)(zhong)復性。


在實際應用中,松材線蟲快速檢測儀主要(yao)用(yong)于兩個方面。一是(shi)(shi)用(yong)于森(sen)林(lin)病蟲(chong)害普(pu)查(cha)與疫情監(jian)測,對野外采集的(de)大量(liang)樣本進行(xing)快速篩查(cha),及時(shi)掌握疫情分布與擴散動態(tai)。二是(shi)(shi)用(yong)于木材流通環節的(de)檢疫,對調(diao)入調(diao)出的(de)松木及其制品進行(xing)現(xian)場(chang)或實(shi)驗(yan)室快速查(cha)驗(yan),防止疫情通過(guo)人為運輸傳播。它(ta)為林(lin)業部(bu)門制定防控策略、劃定疫區、評(ping)估除治效(xiao)果提(ti)供了直接(jie)的(de)技(ji)術依據(ju)和數據(ju)支撐。


綜上所述,松(song)材(cai)線蟲快(kuai)速(su)檢測(ce)儀是(shi)分子(zi)檢測(ce)技術在林業有害生(sheng)物防控領域(yu)的(de)(de)具(ju)體應(ying)(ying)用裝備。它通過將樣本(ben)處理(li)、核酸擴增與(yu)結果分析自(zi)動(dong)化(hua)集成,實現了對松(song)材(cai)線蟲的(de)(de)快(kuai)速(su)、特(te)異、客觀檢測(ce),提升了林業檢疫工作的(de)(de)科技水平與(yu)響(xiang)應(ying)(ying)速(su)度,是(shi)保護森林資源(yuan)的(de)(de)重(zhong)要技術工具(ju)。

基于熒光定量PCR技術的松材線蟲快速檢測儀


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